General

Принцип метода MicroArray — Система EUROArray

Принцип метода MicroArray.

MicroArray – микроматрица, в ячейках которой закреплены одно-цепочные молекулы ДНК, комплементарные к искомым. Матрица нанесена на стеклянной подложке; реакционные области (с молекулами ДНК) выглядят микроскопическими круглыми точками и расположены в строгом порядке. Флуоресцентная метка привязана к молекулам праймера, который необходим для ПЦР амплификации. С целевыми молекулами в реакционных областях связываются умноженные (ПЦР) молекулы ДНК пациента, отмеченные флуоресцентной меткой. Таким образом, флуоресцентный сигнал проявляется только в тех реакционных областях, участки ДНК которых содержатся и в реакционных областях, и в образце пациента.

Каждая реакционная область на слайде состоит из 24 пар точек, позволяющих выявить 24 разных фрагмента ДНК «в дублях».

На каждом слайде 5 реакционных областей – т.е. можно работать с 5-ю образцами одновременно.

 

Пошагово процедура выглядит следующим образом.

1 – Подготовка образца. ДНК пациента необходимо выделить из крови пациента. Для этого используется DNA isolation kit.

2 – ПЦР – умножение целевых фрагментных ДНК и связывание с флуоресцентной меткой. Праймеры с целевыми фрагментами ДНК поставляются готовыми к применению, в составе тестового набора.

3 – Гибридизация ДНК – готовый к использованию буфер для гибридизации поставляется в наборе. Буфер добавляется к образцу и раскапывается на реагентный лоток, который после покрывается слайдами с реакционными областями (технология TITERPLANE). Благодаря гидрофобному покрытию слайдов (между реакционными областями) капли не растекаются и не смешиваются. Происходит гибридизация умноженных и отмеченных фрагментов ДНК и их связывание с комплементарными фрагментами молекул, закрепленными в реакционных областях на слайдах. Процедура проводится в течение 60 мин. при 45 градусах, с использованием “hybridization station”.

4 – Считывание флуоресцентного сигнала из реакционных областей. Для считывания применяется прибор MicroArray Scanner, совместно с программой EUROArrayScan. Считывание результатов 5-ти образцов занимает 20 секунд. По полученным данным автоматически формируется протоколы с результатами.

 

Некоторые тестовые наборы позволяют сократить время на экстракции ДНК с помощью «EUROArray Direct».

В таком случае, вместо DNA isolation kit, в тестовом наборе содержатся экстракционные буферы Е1 и Е2. Общее время на подготовку 40 образцов  — порядка 20 мин.

 

Оборудование, необходимое для выполнения процедуры:

YG 0601-0101    MicroArray Scanner (программа поставляется в комплекте)

YG 0631-0101    Incubator insert (рамка для установки лотка в hybridization station)

ZM 9999-0105   TITERPLANE reagent tray

About author
TinyteriaAdminUser
Recent Posts
11.01.2019
Tinyteria company
The international group of companies Tinyteria has been present in the lab diagnostics market since 2011 specializing in supplies of reagents and equipment to medical, veterinary and agrarian...
Принцип метода MicroArray — Система EUROArray
Принцип метода MicroArray. MicroArray – микроматрица, в ячейках которой закреплены одно-цепочные молекулы ДНК,...
Order


×